Innhold

• retninger

Når du deltar på høyere nivå mikrobiologi, kan læreren kreve at du fullfører et prosjekt der du må identifisere en ukjent bakterie gjennom en rekke tester. For å identifisere denne bakterien riktig, er det nødvendig å ha alt riktig laboratorieutstyr og å vite forskjellige laboratorieprosedyrer. Det er også fordelaktig å ha et flytskjema over bakteriene og deres laboratorietester, slik at du kan identifisere bakteriene dine.

retninger

Kulturplater tillater bakterier å bli isolert for å enkelt identifisere deres egenskaper (Hemera Technologies / Photos.com / Getty Images)

1. Forbered alle tester før du begynner eksperimentet. Dette inkluderer forberedelse av agarplater og rør, samt å forberede de nødvendige indikatorene, for eksempel Kovacs reagens. Merk alle rør og plater riktig slik at de ikke blander, noe som fører til feilaktige resultater.

2. Så bakteriene dine. Dette vil bestemme bakterienes form og farge, for eksempel gram positiv (lilla), gram-negativ (rød eller rosa), kokosnøtter (sirkulær), spirochetes (spiral) eller stenger. For å så din bakterie, trenger du et rent blad, vann, krystallisert fiolett, jod, blekemiddel, safranin, absorberende papir, et lysmikroskop og noen papirhåndklær. Etter å ha flammet sløyfen, bruk den til å legge en dråpe vann på bladet. Flam loopen igjen, og legg deretter en liten mengde av dine ukjente bakterier i dråpen vann. Pass bladet over flammen et par ganger for å tørke og fest bakteriene helt til bladet. Dekk det med krystallisert fiolett, la det stå i et minutt og vask det forsiktig. Dekk så bladet med jod. La på i 30 sekunder og vask deretter. Legg et stykke absorberende papir over bladet for å fjerne overflødig vann. Deretter helle bleken på bladet. Etter fem sekunder vasker du for å fjerne bleken. Til slutt dekke bladet med safranin. Etter 40 sekunder vasker du bladet og tørker det forsiktig med et papirhåndkle. Sett en dråpe olje på bunnen av bakteriene på lysbildet og se under mikroskopet. Legg merke til formen og fargen til de synlige bakteriene.

   
   

3. Test oksidasen i bakteriene dine. For dette trenger du et papirfilter, et oksidasereagens, E. coli, Pseudomonas og dets ukjente bakterier. I denne testen er E. coli og Pseudomonas kontrollene. Din bakterie bør være mindre enn 24 timer gammel for denne testen. Flamm håndtaket og legg en liten mengde av hver bakterie på et stykke papirfilter. Bruk en dråper til å plassere en dråpe av reagensoksidasen i hver bakterie. Merk etter fargen på hver bakterie etter 10 sekunder. E. coli vil gi et positivt resultat, og Pseudomonas vil gi et negativt resultat. Bakteriene positive for cytokromoksydase enzymet vil bli lilla, og de negative bakteriene vil ikke forandre farge.

4. Test for hydrogensulfid (SIM). Vri håndtaket og bruk det til å plukke opp noen bakterier fra platen. Inokuler SIM-røret med bakteriene og dekk det. La denne røret stå i ovnen i 18 til 24 timer ved 37 ° C. Identifiser om bakterien din er mobil (har flagellum). Hvis det er vekst og skyighet langt fra hvor du inokulerte bakteriene, er den mobil. Sett deretter to dråper Kovac reagens i røret. Hvis den har noen fargeendring til rød eller rosa, er bakterien positiv for denne testen og inneholder tryptofan, og er dermed en indolprodusent. Hvis røret blir svart, produserer dets bakterier hydrogensulfid.

   
   

5. Utfør en Simmon citrat test. Inokuler bakteriene i to reagensrør med Simmons agar. La dem stå i ovnen i 18 til 24 timer ved 37 ° C. Agar er i utgangspunktet grønt, men hvis bakteriene bruker citrat som karbonkilde, vil fargen skifte fra grønt til blått. Blå er det positive resultatet. Hvis rørene forblir grønne, er deres bakterier negative for bruk av citrat som en enkelt kildekilde.

6. Utfør en metylrød test (MRVP). For denne testen trenger du to rør som inneholder en løsning av pepton, buffere og dextrose (eller glukose). Inokuler hvert rør med de ukjente bakteriene og kom tilbake til ovnen i 18-24 timer ved 37 ° C. Når du er klar, legg tre dråper metylrødt til et rør. Dette blir din MR-rør. Hvis røret forandrer seg fra gul til rødt, er bakterien positiv og bruker en blandet syrevei under gjæring (melkesyre, eddiksyre og myresyre produseres). I det andre røret tilsettes tre dråper av VP-reagenset. Hvis røret blir rødt, er bakteriene positive for dannelsen av diacetyl, et fermenteringsprodukt. Hvis røret blir brun, er bakterien din negativ.

7. Finn bakteriene dine ved å merke de positive og negative resultatene i flytskjemaet.