Innhold
High performance liquid chromatography (HPLC) er et verktøy som brukes til å skille stoffer fra en blanding. Separasjonen og identifikasjonen av visse kjemikalier skjer hovedsakelig i systemets kromatografiske kolonne. Mange kolonnetyper er tilgjengelige for CLAE, og hver brukes til en bestemt type analyse. C18-kolonnen er den sterkeste ikke-polære som vanligvis brukes. Etter kontinuerlig bruk over lengre tid reduseres strømningshastigheten til løsningsmidlet gjennom det, og analysetiden øker. En annen årsak til reduksjonen i analysetiden er å ha prøver som etterlater små mengder kjemikalier i kolonnematerialet, noe som reduserer muligheten til å skille dem. Gjenopprettingen av overflaten kan gjøres ved å behandle materialet med en serie spesifikke løsemidler for å rense det fra gjenværende prøver og revitalisere støttematerialet.
Trinn 1
Fjern kolonne C18 fra strømningsretningen og plasser den i motsatt retning. Å få løsningsmidlet tilbake gjennom det vil lindre akkumuleringseffekten som oppstår over tid. Det må utvises forsiktighet for ikke å etterlate for mye materiale samlet på slutten av kolonnen. Noen fabrikker bruker et større maske på toppen slik at når strømmen endrer retning, er masken i posisjonen under. Denne metoden for restaurering kalles reversering av flyt. For å forhindre at opphopning strømmer til systemdetektoren og muligens forårsaker en hindring, må du la den fungere uten at detektoren er tilkoblet og lede strømmen fra kolonnen til avhending.
Steg 2
Plasser passasjerøret for løsemiddel i en serie løsningsmidler for å eluere enhver forbindelse som holdes i kolonnen i motsatt retning. Disse løsningsmidlene varierer i hydrofile egenskaper. Ved å variere dem vil du eluere forbindelser av like mangfoldig hydrofil karakter. Bruk 50 ml av hvert av følgende løsningsmidler, suksessivt: vann (hvis du bruker en buffer), metanol, isopropanol, diklormetan, heksan, diklormetan og isopropanol.
Trinn 3
Bytt kolonnen i riktig retning og la løsningsmidlet strømme gjennom det. Bruk minst 75 ml til å vaske den før du fortsetter. Test det med et mønster du brukte da det var nytt, og sjekk resultatene. Vær oppmerksom når du når de maksimale oppbevaringspunktene og den totale analysetiden. I hvilken grad disse attributtene samsvarer med den første testen da den fremdeles var ny, vil indikere i hvilken grad kolonnen ble gjenopprettet. Hvis resultatene ikke er tilfredsstillende, må du erstatte kolonnen med en ny og kaste den gamle.
