Innhold
Kald alkohol brukes til å skille DNA fra vannbaserte løsninger, slik at det kan renses for senere genetisk testing. Å legge til alkohol i en løsning som inneholder DNA, er en enkel måte å gjøre det rent ved lavere temperaturer og redusere enzymene som forringer det, noe som gir bedre utvinningsresultater.
Breaking Cell Walls
Ekstraksjonsprosedyrene for oppnåelse av rent DNA må kvitte seg med alle molekylære og kjemiske komponenter i vevet hvorfra DNAet ekstraheres. De første trinnene innebærer ødeleggelse av cellevegger. Dette kan gjøres med ulike kjemiske midler som er kaustiske for cellemembraner, men ikke skade DNA. Cellene kan også sonikeres, homogeniseres eller freses for å ødelegge membranene.
Fjerning av lipider
Når celleveggene er ødelagt, blir det tilsatt et vaskemiddel for å kvitte seg med fettene og oljene som utgjør cellemembranene. Vaskemidler forårsaker oppløsning av oljer og fett i oppløsning.
Fjerning av proteiner
Proteiner og enzymer kan fordøyes ved å tilsette en protease til løsningen. Proteaser bryter ned proteiner i små peptider og aminosyrer.
Nedfellende DNA
Tilsetningen av iskold alkohol til en løsning vil utfelle og aggregere DNA'et. Det genetiske materialet kan oppsamles ved sentrifugering av prøven og dekantering av væskelaget. Den bør eksistere som et lite sediment i bunnen av sentrifugerøret.
Rensende DNA
DNA-en kan vaskes ved å suspendere i en kald alkoholoppløsning og re-sentrifugeres flere ganger for å oppnå en meget ren prøve. Typiske alkoholer som brukes er etanol og isopropanol. Denne prosessen etterlater en veldig ren prøve i strenge tester.
