Innhold
High Performance Liquid Chromatography (HPLC) er en vanlig metode for laboratorieanalyse hvor en prøve skilles i kjemiske komponenter når den passerer gjennom en kolonne. Denne kolonnen er fylt med et porøst materiale, typisk silikagel. En standard revers fase kolonne, som C8, kan noen ganger tette eller bli forurenset. Disse kolonnene kan hentes ved hjelp av svært enkle teknikker.
retninger
-
Slå av kolonnen og vend posisjonen, slik at den mobile fasen nå kommer inn gjennom det som normalt er utgangen av kolonnen. Fest et uttak til den andre enden av kolonnen (som var den opprinnelige oppføringen), og la den renne ut i en utladning.
-
Pump en rekke løsningsmidler i rekkefølge av avtagende polaritet. En anbefalt basisserie er å starte med metanol, deretter bytt til acetonitril, deretter acetonitril / isopropanol (75:25), isopropanol, metylenklorid og heksan. Hvis mobilfasen som var i kolonnen var absorberende, anbefales en passasje med vann før i metanol. En strøm av en til to milliliter per minutt er tilstrekkelig, og omtrent ti volum-kolonner av hvert oppløsningsmiddel bør pumpes. Volumkolonnen er kolonnens indre rom og beregnes av (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), hvor DI er kolonnens indre diameter og L er lengden.
-
Pump ytterligere ti volumer isopropanol gjennom kolonnen for å forberede den til bruk med den opprinnelige mobilfasen. Hvis den opprinnelige mobilfasen har blitt polstret, pump også vann gjennom kolonnen etter isopropanol, før du går tilbake til den opprinnelige mobilfasen.
-
Slå av kolonnen, reverser den og sett inn igjen slik at den befinner seg i sin opprinnelige posisjon (slik at den bevegelige fasen kommer inn i høyre side av kolonnen). Koble høyttalerutgangen til detektoren igjen.
Gjenoppretter kolonnen
tips
- Hvis denne prosessen ikke rengjør kolonnen grundig, kan en 50:50 blanding av dimetylsulfoksid (DMSO) og dimetylformamid (DMF) brukes. Rester av proteiner og metallioner kan kreve andre typer løsningsmidler, for eksempel ionsparende reagenser eller en løsning av etylendiamintetraeddiksyre (EDTA).
advarsel
- I enkelte apparater vil ryggraden ha en grov metallsikt som innløp. I dette tilfellet vil tilbakestilling av kolonnen tillate den stasjonære fasen å forlate kolonnen, og dette anbefales ikke. Kontakt forhandleren din hvis du er usikker.
- Løsningsmidlet som brukes i denne prosessen er potensielt giftig ved inntak og innånding. Bruk normale forsiktighetsregler ved håndtering.
Hva du trenger
- HPLC-enhet
- vann
- metanol
- acetonitril
- isopropanol
- Metylenklorid
- heksan
